什么是螢光原位雜交技術(shù)

相比于傳統(tǒng)用于檢測(cè)DNA/RNA存在或表現(xiàn)量的PCR，RT-PCR或real-time PCR等技術(shù)，F(xiàn)ISH存在以下特色：

1.其檢測(cè)方式為直接將探針?biāo)腿牍潭ê玫募?xì)胞/組織中進(jìn)行檢測(cè)，比起將核酸取出的PCR檢測(cè)方式，F(xiàn)ISH除了偵測(cè)表現(xiàn)量的變化之外，更能夠?qū)δ繕?biāo)核酸序列在細(xì)胞內(nèi)或是組織內(nèi)的分布有視覺(jué)性的直接觀察。

2.PCR產(chǎn)物需要用膠體電泳的方式觀察。引子對(duì)間可能的相互干擾或是相似的產(chǎn)物大小會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果的觀察，而使得很難藉由在同一個(gè)反應(yīng)中放入不同的引子對(duì)來(lái)同時(shí)檢測(cè)不同的產(chǎn)物。然而FISH可以利用不同的螢光蛋白，簡(jiǎn)單的以顏色來(lái)分辨不同的目標(biāo)序列。

3.對(duì)比一般PCR需要一定數(shù)量的細(xì)胞來(lái)萃取DNA/RNA進(jìn)行反應(yīng)，F(xiàn)ISH可以在單個(gè)細(xì)胞的數(shù)量級(jí)進(jìn)行獨(dú)立的檢測(cè)，如圖三。這在諸如病毒感染、細(xì)胞病變或突變等領(lǐng)域的檢測(cè)及治療的評(píng)估扮演了重要的角色。

圖解：HeLa Cell以不同劑量的siRNA處理，同時(shí)以FLSH技術(shù)偵測(cè)RNA/siRNA的量變化

在此以乳癌HER2基因的檢測(cè)說(shuō)明FISH技術(shù)在臨床應(yīng)用上的價(jià)值，HER2的全文為第二型人類表皮生長(zhǎng)因子接受體，是一個(gè)在正常細(xì)胞中也會(huì)表現(xiàn)的基因。但是在癌癥細(xì)胞中此基因會(huì)被過(guò)度表現(xiàn)使得細(xì)胞表面有過(guò)多的生長(zhǎng)因子接受體可以接受生長(zhǎng)因子的刺激，致使細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂快速，表現(xiàn)出癌細(xì)胞的行為。乳癌病患中大約有25~30%為HER2陽(yáng)性反應(yīng)，由于其生長(zhǎng)快速的特性使得治療的策略需要特別謹(jǐn)慎的選擇。因此HER2基因的檢測(cè)在乳癌病例中非常的重要，目前的檢測(cè)方式為免疫組織化學(xué)染色法與FISH兩階段的檢測(cè)方式。由操作快速、不需要螢光顯微鏡的IHC技術(shù)進(jìn)行初步檢測(cè)。呈現(xiàn)弱陽(yáng)性以上反應(yīng)之檢體轉(zhuǎn)由FISH技術(shù)進(jìn)行量化檢測(cè)，結(jié)果交由醫(yī)師與病患討論接續(xù)之治療方式。

FISH技術(shù)提供了基因表現(xiàn)定量與分布的檢測(cè)方式，并能以視覺(jué)化的方式被觀察。結(jié)合PCR、IHC、西方墨點(diǎn)法以及凝集反應(yīng)等檢驗(yàn)技術(shù)，可以讓我們對(duì)細(xì)胞層級(jí)的分子生物學(xué)與生物醫(yī)學(xué)研究有更多觀察的手段，并有更全面性的了解。